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Cell Counting Kit(CCK试剂盒)(K009-500)


CellCounting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。




目录号产品名称规格价格
K009-100CCK100tests180.00
K009-500CCK500tests615.00
K009-1000CCK1000tests1150.00
K009-3000CCK3000tests2800.00
K010-100Cell Counting Sensitive Kit100tests234.00
K010-500Cell Counting Sensitive Kit500tests799.00
K010-1000Cell Counting Sensitive Kit1000tests1495.00
K010-3000Cell Counting Sensitive Kit3000tests3640.00


CCK是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其他MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点:


-CCK被线粒体内的脱氢酶还原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液来溶解,而WST和XTT、MTS产生的formazan都不是水溶性的,因而可以省去后续溶解步骤。

-CCK比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。

-CCK和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。


 


CCK毒性:CCK和其他检测方法相比,对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用。

CCK应用:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏实验。


CCK法与其他检测方法之间的比较



操作说明:

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。

二、细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测

1、在96 孔板中配置100ul的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向培养板加入10ul不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、想每孔加入10ul  CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

备注:

① 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

② 有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入

CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

③ 白细胞可能需要培养较长时间。

④ 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100ul培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100ul培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

⑤ 如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

⑥ 培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

活力计算:

  细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100

A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

保存条件:

4℃避光保存,有效期一年。


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