美国Biozellen®基质胶在小鼠皮下成瘤实验中的应用
一、应用
•3D细胞球体培养
•小鼠皮下成瘤
•细胞侵袭
•适合用于3D细胞药物筛检平台
•细胞生长和分化
•代谢/毒理学研究
二、试剂盒组分
B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10 | |||
货号. | Components | Amount | Content |
B-P-00002-A | A 基质胶 (2X) | 4、8、20 | 0.5mL / tube |
B-P-00002-C | C 缓冲溶液 (10X) | 1、2、1 | 1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT |
B-P-00002-D | D 缓冲溶液 (10X) | 1、2、1 | 1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT |
三、小鼠皮下成瘤实验准备程序
A、细胞房内材料准备、试剂制备及步骤
(1) 材料准备:
1. 冰盒、2. 37 ℃ 水浴槽、3. C缓冲溶液(10X)、4. 无血清细胞培养液 (例如: 无血清DMEM,DMEM-F12等,不可用 PBS )、5. A胶 (2X)、6. 细胞培养液、7. 23-26G针头、8. 1 mL针筒、9. 细胞。
(2) 试剂制备:
1、C缓冲溶液 (0.5 X) 制备 : 使用 37 ℃ 水浴回温的无血清细胞培养液 (例如: 无血清DMEM或DMEM-F12等,不可用 PBS ) 稀释 C缓冲溶液 (10 X) 至 C缓冲溶液 (0.5 X), 即体积稀释20倍。使用前放置37度水浴槽。(例如:1 mL C缓冲溶液 (10 X) + 19 ml 无血清DMEM; 若未使用完毕,可先保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)
2、A胶 (1X) 制备 : 将 A胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于37 ℃ 水浴槽回温10分钟,确认完全溶解。再将 37 ℃ 水浴回温的无血清细胞培养液取 0.5 mL, 加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A胶 (2X),配置成 1 mL 的 A胶 (1X)。使用前置于37度,可降低黏度。 (单次使用,勿重复冷冻解冻 A胶 (1X) )
(3)步骤:
1、取细胞溶液离心后收集细胞沉淀,与C缓冲溶液 (0.5 X) 均匀混合使细胞浓度为3*106 cells/mL。
2、A胶 (1X) 与步骤 1 含 C缓冲溶液 (0.5 X) 的细胞系悬浮液,按照 2:1 比例均匀混合配置,细胞悬浮液最终浓度为 106 cells/mL。使用前置于37℃,可降低黏度。 (C缓冲溶液用于A胶凝胶反应,例如0.5ml C 缓冲溶液(0.5 X)含细胞 加入 1ml A胶 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)
3、选用 23-26 G 的针头 (建议选用 24 G) 及 1 mL 针筒,抽取 步骤2 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液至所需注射体积 (例如:0.2-0.6 mL) 。室温37℃至20℃操作抽取。 (若抽取时发生塞针状态,可先把针头拔掉,以针筒进行抽取,建议一次抽取配置好所需针筒数量,避免步骤2 溶液过度凝胶,发生塞针)
4、将抽取好步骤 3 的针筒,带入动物房, 若短时间无法施打建议置于冰上。
B、动物房内材料准备及步骤
(1)材料准备:
1. 含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒、2. 皮肤消毒剂 (例如 : 酒精)、
3. 手套、4. 实验小鼠、5. 麻醉小鼠的试剂
(2)步骤:
1、室温下可直接注射。若是置于冰盒上的针筒,回到室温后,待液化再进行注射。 含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒,以皮下注射方式,注射实验所需的体积至实验鼠 (建议皮下注射量为 0.2 mL,实际状况依需求而定)。(针筒放冰上注射阻力会上升, 放室溫会液化注射阻力小。注射时若因凝胶缘故而阻力变大,需缓慢注射避免针头喷落)
注1 : 注射体积可依不同实验目的做调整,若为皮下血管生成研究注射体积需至少0.5 mL以上。
注2 : 此步骤依实验需求可执行或不执行,若需呈现明显的皮下注射隆起效果,可调整2.试剂制备将C缓冲溶液 (10 X) 稀释15倍,变成C缓冲溶液 (0.66 X),再执行后续成胶实验;提高C浓度,可提高胶体硬度。
2、培养一至三周后观察量测接种的肿瘤尺寸。
注3 : 若为血管生成研究,应注射含VEGF及heparin的A胶,以促进血管生成。约三天后,可摘取含有新血管生成的肿瘤组织。
四、Biozellen®3D细胞培养基质胶套装
货号. B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
规格 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage 4℃保存、 保存两年
www.bio-zellen.com
五、案例分享
A.形成3D肿瘤球体成功案例分享
B.Biozellen基质胶被溶解后分离的完整3D细胞结构照片
培养后的3D细胞球体, 在Biozellen基质胶被试剂盒里面的
D Buffer溶解分离后仍然可以得到完整的3D细胞结构