Thp-1细胞高效率转染条件分享
一、转染材料准备
1. 转染试剂用量:10ul
2. siRNA浓度:20um/L
3. 细胞密度:1*106-1*105
4. 转染用培养板:6孔板
5. 转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600025
6. 转染时间:48小时
7. 细胞培养胎牛血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清
8. 细胞冻存液:L0100无血清细胞冻存液
注意:本细胞转染用量条件不适合lipo使用。
操作过程:
1.提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。
2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合,用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。
3.在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清。
4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。
5.分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。
二、转染试剂产品介绍
Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂,此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。
三、优秀表现
Zeta Life多肽小分子转染试剂尺寸大小是传统脂质体转染试剂体积的1/10;
本转染试剂是通过细胞内㖔和细胞主动吸收进入细胞;
本转染试剂进入后对细胞膜无物理性损伤,不易出现细胞变形,保持高的细胞活力;
不激活细胞表面或细胞体内marker;
可反映真实的细胞通路蛋白原始数据;
可转染免疫细胞、悬浮细胞等;